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干熱滅菌柜菌試驗(yàn)

(1) 根據(jù)試驗(yàn)要求,制備枯草桿菌黑色變種芽孢懸液和芽孢樣片。
　　(2) 每次試驗(yàn)取 2 個(gè)菌片為一組,平放于無菌平皿內(nèi),勿重疊。加蓋,分置于滅菌柜的各層,內(nèi)、中、外不同部位。試驗(yàn)時(shí),滅菌柜內(nèi)除菌片樣本外,還應(yīng)滿載以模擬的常規(guī)處理物品。
　　(3) 關(guān)閉柜門,開啟電源,按滅菌柜設(shè)計(jì)程序進(jìn)行滅菌。滅菌完畢,取出平皿,將菌片取出接種于含 5.0ML 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基試管中,置 37℃ 培養(yǎng)箱內(nèi)作定性培養(yǎng)。72 H 后觀察結(jié)果。
　　肉湯管混濁者表示有菌生長, 判為陽性; 肉湯管澄清者表示無菌生長, 繼續(xù)培養(yǎng)至第 7 D, 若仍無菌生長,判為陰性。
　　對(duì)難以判定的肉湯管,取其中 0.2ML 懸液接種營養(yǎng)瓊脂平板,用滅菌 L 棒涂佈均勻,置 37℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48 H 后涂片染色，在顯微鏡下觀察菌落形態(tài),或進(jìn)一步做其他試驗(yàn),以判斷生長者是否為試驗(yàn)菌。若有非試驗(yàn)菌污染，應(yīng)查找原因重新進(jìn)行試驗(yàn)。
　　(4) 測試中,應(yīng)同時(shí)設(shè)立定性和定量陽性對(duì)照組(菌片對(duì)照)與陰性對(duì)照組(培養(yǎng)基對(duì)照)。
　　(5) 定量陽性對(duì)照組,以同批試驗(yàn)用菌片放在室溫下,待試驗(yàn)組滅菌接種后,立即將該菌片 2 片分別移入含 5.0ML PBS試管中,各振蕩 80次洗滌。進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
　　(6) 定性陽性對(duì)照組，以同批試驗(yàn)用菌片放在室溫下,待試驗(yàn)組滅菌接種后,立即將試驗(yàn)菌片 2 片，分別接種于 5.0ML 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱中作定性培養(yǎng),觀察有細(xì)菌生長情況。
　　(7) 陰性對(duì)照組,以空白樣片 2 片，分別接種于 5.0ML 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,同時(shí)將未接種過的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中作定性培養(yǎng),觀察有無細(xì)菌生長。
　　(8) 試驗(yàn)重復(fù) 5 次。
　　(9) 在 5 次試驗(yàn)中,每次試驗(yàn)中陽性對(duì)照菌片的回收菌量均應(yīng)達(dá)5×`10^5` CFU/片～5×`10^6`CFU/片；定性陽性對(duì)照組，細(xì)菌生長良好；陰性對(duì)照應(yīng)無菌生長。陽性或陰性對(duì)照若有不符合上述要求的結(jié)果,試驗(yàn)作廢,重新進(jìn)行。